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制备分离对色谱仪装置的要求
应用再循环技术,要注意峰的扩展问题,它包括色谱柱内和柱外的两部分。只有当柱外的峰扩展小于柱内的峰扩展时,再循环操作才是真正有效的。这就要求往外部分的检测器、 泵和连接管道都具有小的死休积。高压液相色谱中使用的检测器,其检测池体积通常都在10um以内,均可满足这个要求。连接管道,可以使用前面介绍过的小口径的不锈铜管,其死 体积亦是很小的。
只有高压泵的死体积,是我们应当考虑的问题。气动放大泵和螺旋传动式 注射泵,由于泵的死体积大,是不适于供再循环使用的。死体积小的往复式隔膜泵,可用于 再循环体系。目前在商品液相色谱仪中广泛使用的往复式柱塞泵,用作再循环操作尤为适宜。 不过,双头柱塞泵的死体积比单头的多一倍,在再循环中使用反而不如单头的好。
对于制备分离来说,虽然使用较粗的连接管道,然而,由于色谱柱内径的加粗,柱外效应相对地来说就不那么重要了。故上面所讨论的再循环的柱外峰扩展问题,对制备分离的色 谱柱,只要使用合适的泵,就可不予考虑。
再循环操作中还应当注愈的是色谱峰再次发生重叠的问题。这是指经过再循环操作已分离的k值较小的峰,在循环体系中与前一循环值大的峰发生重叠,这种情况在液一固、液或键合相色谱再循环分离(包括极性范围宽的组分样品)中可能出现。不过,由于每次循环的洗脱液都是通过检测器的,故峰重益的不良后果能够预先知道。当从检测器上预料到可 能发生这样的不良后果时,就要采取必要的措施,例如,预先收集可能导致峰发生重受的那 些组分,使再循环得以继续进行。
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